食藥署公告檢驗方法 · MOHWV0036.06

食品中四環素殘留檢驗

Tetracyclines in Foods

食品安全檢測　·　3 小時課程　·　含 6 個互動小遊戲
動物用藥殘留 · LC-MS/MS · McIlvaine-EDTA · SPE · 7 品項

畜禽水產/蛋/奶/蜜LC-MS/MSEDTA 螯合SPE 淨化抗藥性風險

先想一想

你吃的雞肉、雞蛋、蜂蜜裡，
會不會殘留抗生素？

畜禽水產若用了四環黴素類抗生素又沒遵守停藥期就上市，藥物會殘留。
吃進殘留抗生素恐引發過敏、並助長抗藥性細菌。食藥署 MOHWV0036.06 用 LC-MS/MS 一次驗 7 種。

停藥期最大殘留限量 MRL 抗藥性 AMR過敏

背景

四環黴素類抗生素為什麼要管

💊

廣效抗生素

四環素、土黴素、金黴素…用於畜禽水產治療與防病

⏳

停藥期

用藥後須等藥物代謝到安全值才能上市；違規即超標

🦠

抗藥性 AMR

殘留抗生素會篩選出抗藥性細菌，威脅公共衛生

🍯

涵蓋食品廣

肌肉、內臟、脂肪、蛋類、乳汁、蜂蜜都要監測

7 品項

這次方法涵蓋的四環黴素類

🧬

四種母體藥物

四環黴素(TC)、羥四環黴素/土黴素(OTC)、氯四環黴素/金黴素(CTC)、脫氧羥四環黴素/多西環素(DC)

🔄

三種差向異構物

4-epimer-TC、4-epimer-OTC、4-epimer-CTC——母體在酸性下會差向異構化的產物，也須監測

共 7 品項：4 個母體 + 3 個差向異構物(epimer)。

小遊戲 ①母體藥物 vs 差向異構物0 / 7

把 7 個分析物分到「母體抗生素」或「差向異構物(4-epimer)」。

方法總覽

四環素殘留檢驗的流程

萃取(McIlvaine+EDTA) → 三氯醋酸沉澱蛋白 → 固相萃取(SPE)淨化 → LC-MS/MS 以 MRM 鑑別定量。

關鍵難題

四環素為何難萃取

四環素結構會螯合金屬離子(Ca、Mg、Fe)並結合蛋白質，被「困」在基質裡 → 回收率差。加入 EDTA 競爭螯合金屬，把四環素釋放出來，是本法成敗的關鍵。

萃取設計

McIlvaine 緩衝液 + EDTA

McIlvaine 緩衝液(檸檬酸 + 磷酸氫二鈉)調到 pH 4：酸性下四環素穩定、好萃取
萃取液含 EDTA-Na₂：螯合金屬、解開四環素與基質的鍵結
加三氯醋酸沉澱蛋白質，離心去除
低溫(4°C)離心、12000×g，取上清液

為什麼 pH 4？
四環素在中性/鹼性易降解、在強酸易差向異構化；弱酸(pH 4)是穩定與萃取的甜蜜點。

淨化

固相萃取 SPE 去基質干擾

🧪

SPE Oasis HLB

萃取液過固相萃取匣，分析物吸附、雜質先洗掉

💧

沖提與濃縮

以甲醇沖提四環素，加 DMSO 後氮氣吹乾、再復溶

🎯

為何要淨化

食品基質會抑制/增強離子化(基質效應)，淨化後訊號更乾淨

萃取(放出來) → 沉澱蛋白(去大分子) → SPE(去小分子雜質) → 乾淨檢液上機。

小遊戲 ②四環素方法即時測驗0 / 5

LC-MS/MS 偵測

CSH C18 + ESI⁺ + MRM

管柱 ACQUITY CSH C18(1.7 µm)，管柱溫 40°C；移動相 0.1%甲酸水/乙腈梯度
游離：ESI 正離子(四環素易質子化帶正電)
偵測：MRM，每物監測母離子→子離子(如 TC 445>410、OTC 461>426)
以基質匹配檢量線定量；鑑別靠滯留時間 + 離子比

為何又是 LC-MS/MS？
殘留是 ppb 級痕量、又是多殘留混合 → 需要 MRM 的高選擇性與靈敏度。

小遊戲 ③萃取階段 vs 淨化階段0 / 6

把 6 個試劑/步驟分到「萃取階段」或「淨化(SPE)階段」。

小遊戲 ④四環素殘留檢驗流程排序— / 6

用 ▲▼ 把四環素殘留檢驗的 6 個步驟排成正確順序。

小遊戲 ⑤決策挑戰：四環素判斷0 / 5

附表

7 品項四環黴素一覽（點欄位排序）

中文名 ⇅	英文名 ⇅	類別 ⇅	定量離子對 ⇅

離子對整合自 MOHWV0036.06 附表(母離子>定量子離子)。

層析分離

7 品項的滯留時間

LC-MS/MS 參考層析的滯留時間(分)。差向異構物通常比母體更早沖出，CSH C18 可逐一分開。

殘留與抗藥性

為什麼非管不可

⏳

停藥期是關鍵

遵守停藥期讓藥代謝到 MRL 以下，是合法上市的前提

🦠

抗藥性 AMR

長期暴露低劑量抗生素會篩選出超級細菌，難以治療

🤧

過敏與菌叢

殘留可能引起過敏、擾亂腸道菌叢

📏

MRL 與 LOQ

各食品有最大殘留限量；本法 LOQ 0.005 ppm(內臟 0.05 ppm)

小遊戲 ⑥計算闖關：殘留含量未作答

某內臟檢體取樣 M = 2 g、最後定容 V = 2 mL；由檢量線得濃度 C = 0.05 µg/mL。求殘留含量(ppm)。公式：含量 = C×V/M。

ppm

重點整理

今天的五個關鍵

MOHWV0036.06：LC-MS/MS 驗畜禽水產/蛋/奶/蜜中 7 種四環黴素
四環素會螯合金屬、黏蛋白 → 必加 EDTA 釋放
萃取用 McIlvaine 緩衝液 pH 4 + EDTA + 三氯醋酸沉澱蛋白

SPE(Oasis HLB)淨化 → CSH C18 / ESI⁺ / MRM
含量 = C×V/M；LOQ 0.005 ppm(內臟 0.05)；含 3 個差向異構物

自我檢核

今天結束，你應該會…

✓說明為什麼要管制食品中四環黴素殘留(停藥期、抗藥性)
✓說出 7 品項：4 個母體 + 3 個差向異構物
✓解釋四環素為何難測、EDTA 扮演什麼角色
✓說明 McIlvaine 緩衝液 pH 4 與三氯醋酸的用途
✓描述 SPE 淨化的目的(去基質干擾)
✓說出 LC-MS/MS 用 ESI⁺ 與 MRM 的原因
✓用 C×V/M 計算殘留含量並對照 MRL/LOQ
✓解釋什麼是差向異構物、為何也要監測

點一下打勾——確認自己真的會了。

延伸 · CONNECT

從一顆雞蛋
看懂藥物殘留

🔗 方法骨幹：LC-MS/MS + MRM 同樣用於甜味劑、農藥；本法多了 EDTA 螯合的巧思
🔬 銜接：質譜 (Ch11)、HPLC (Ch13)、固相萃取、食品安全衛生管理
🧪 思考：為何四環素一定要加 EDTA？差向異構物代表什麼？停藥期沒到就上市會怎樣？

動物用藥殘留LC-MS/MSEDTA 螯合SPE抗藥性